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天下足球直播视频直播:百新意提供2019-nCoV病毒全部相關蛋白!

發布時間:2020-02-13 來源:百新意生物科技 閱讀:936

天下足球直播 www.lkqov.com.cn 目前,發端于湖北武漢的新型冠狀病毒肺炎疫情正在加快蔓延,形勢異常嚴峻。

一向用產品說話的百新意生物科技,于疫情開始就緊急召集公司精銳力量,于兩周內密集完成了如下2019-nCoV重組蛋白產品的研發,部分原料已開始量產和銷售,全線產品已開始接受咨詢與預訂。百新意擁有國際一流的抗體與蛋白質工程技術,我們保證抗原質量可靠,抗體萬里挑一!關于百新意的抗體優化能力,可參見百新意大講堂系列文章《抗體優化漫談》、《人源化》、《親和力成熟》和《穩定性優化》。關于原料和檢測方法的選擇,請參考產品列表后的內容。

武漢挺住,兄弟們加油!

原料與方法學的選擇

冠狀病毒可引起動物和人類的呼吸道和腸道感染。它們曾經不被認為對人類具有高致病性,直到2002年和2003年在中國廣東爆發了嚴重急性呼吸綜合征(SARS)。SARS發生十年后,另一種高致病性冠狀病毒中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)出現在中東國家。SARS冠狀病毒(SARS-CoV)利用血管緊張素轉化酶2(ACE2:angiotensin-convertingenzyme2)作為受體并主要感染有纖毛的支氣管上皮細胞和II型肺泡壁細胞,而MERS-CoV利用二肽基肽酶4(DPP4:dipeptidylpeptidase4,也稱為CD26)作為受體感染無纖毛的支氣管上皮細胞和II型肺泡壁細胞。SARS冠狀病毒和MERS冠狀病毒分別從果子貍和單峰駱駝傳染給人類,這兩種病毒都被認為起源于蝙蝠。

2019年底,我國爆發了新一輪的冠狀病毒(2019-nCov)疫情,截止至2020年2月5日,已造成了超過24000人感染。就目前情況而言,該病毒的感染性超過了SARS-Cov,但重癥率和致死率尚不如SARS-Cov。目前臨床確診主要采用核酸診斷和CT的結合,確診速度較慢。眾所周知,免疫學方法具有靈敏度高、假陽性低、對檢測環境要求不高和檢測速度快等優點,因此非常適合快速篩查。

1月24日,權威醫學期刊《柳葉刀》發布的“2019武漢新型冠狀病毒臨床特點”文章中做了細胞因子和趨化因子的測定,結果發現ICU患者和非ICU患者的初始血漿IL-1β,IL-2,IL-6,IL7,IL8,IL9,IL10,GM-CSF,IFN-γ,VEGF,PDGF,和TNFα濃度均高于健康成年人,提示了細胞因子風暴(CRS)的可能。因此,除了2019-nCov相關蛋白和抗體,我們還給出了細胞因子風暴相關抗體和抗原供IVD廠家選用。百新意提供的抗體全部是人鼠嵌合抗體或人源化抗體,因此HAMA效應較低,更適合檢測自身免疫疾病相關指標。

1、原料的選擇

2019-nCoV是一類新發現的單股正鏈RNA冠狀病毒2019-nCov,其基因組5’端有甲基化“帽”,3’端有polyA“尾”結構。冠狀病毒,都有個顯著的特征(圖1),就是衣殼上長皇冠(crown),即Spike蛋白(簡稱S蛋白)。病毒基因組為連續線性單鏈RNA,直徑在75-160nm。冠狀病毒基因組依次編碼棘突蛋白S(spikeprotein)、包膜蛋白E(envelopeprotein)、膜糖蛋白M(membraneglycoprotein)與核衣殼蛋白N(nucleocapsidprotein)。這么多種蛋白,到底哪些對于診斷的價值更高呢?下面我們就用最簡潔的語言告訴您最關鍵的信息。

圖1 2019-nCoV病毒顆粒示意圖(A)


(1)S蛋白:診斷和治療皆可

2019-nCoV和SARS-CoV的基因組都編碼一個大棘突(Spike)蛋白(圖2A)白可分為S1、S2和跨膜-膜內結構域。兩種蛋白的S1結構域同源性較低,約68%。但S2結構域相當保守,序列一致性高達94%以上。其中S1上的受體結合結構域RBD負責與宿主細胞上的ACE2結合,兩種病毒的S蛋白與ACE2的親和力均在15nM左右(圖2B)兩種病毒的S蛋白同源性較高,因此推測2019-nCov的S蛋白與ACE2的結合介導了病毒的侵入。正式由于這一特性,針對S蛋白的治療和診斷顯得尤為重要。

圖2 2019-nCovS蛋白結構模型(A)與2019-nCovSRBD-ACE2親和力測定(B)


(2)N蛋白:診斷

圖3 SARS-CovN蛋白的結構示意圖


N蛋白的N端與C端均可與病毒RNA結合,C端用于多聚化而形成高聚結構(圖3)。比較SARS-CoV和2019-nCoV的N蛋白序列后發現,二者N蛋白相當的保守,序列一致性高達94%。有文獻表明,SARS-CovN蛋白在病人感染的第二天即可在病人血漿中檢測到,其抗體在感染7天后即可在30%以上病人血中檢出??悸塹攪街諲蛋白的高同源性,因此推測N蛋白可作為2019-nCov早期篩查的一個重要指標。然而,需要注意的是,隨著感染的進行,N蛋白在血液中含量將快速下降(圖4A),此時可檢測抗N或其他蛋白的抗體以防止漏檢(圖4B)。另有文獻報道,SARS-CoV全長N蛋白會與感染其他冠狀病毒的病人血清交叉反應,由于N蛋白的高同源性,推測2019-nCoVN蛋白亦可能有此現象,因此特異性可能會有一定問題。為了降低非特異,可選用截短的N蛋白。根據對SARS-CoV的文獻調研,我們設計了兩種截短的N蛋白(2020T7和2020T7a),理論上可在不降低靈敏度的前提下降低這種交叉反應。

圖4 N蛋白、抗-N蛋白抗體在血中檢出率隨時間變化曲線


(3)M和E蛋白:輔助診斷,但特異性可能不夠強

M蛋白是病毒顆粒中含量最多的蛋白,可保持病毒的完整形態,并與N蛋白相連接。E蛋白在病毒顆粒中含量不多,其功能與病毒組裝及釋放相關。通過文獻調研,我們認為這兩種蛋白單獨作為2019-nCov的Biomarker并不十分合適,但可作為輔助檢測指標以防止漏檢。一個可能的應用是在檢測抗S和抗N抗體的基礎上,加測抗M和/或抗N抗體;亦可將S,N,M和E蛋白的若干多肽串聯,做成嵌合多肽來檢測抗體。

(4)受體——ACE2:可能可以用于夾心法

ACE2是近年來新發現的一種金屬蛋白酶,屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白,具有羧肽酶活性,在調節心、腎功能以及控制血壓中起關鍵作用。人類ACE2的細胞外區域由2個亞基組成,其中鋅金屬肽酶區域可以進一步分成2個亞域(Ⅰ和Ⅱ),形成一個長而深的裂縫,環繞裂縫頂端的隆起線帶有很高的負電荷,這些負電荷與SARS-CoV/2019-nCoVS蛋白上RBD的正電荷互補(計算表明,2019-nCoVSRBD的pI為9.72,而ACE2的pI為5.67),從而與S蛋白RBD結合(圖5)。由于2019-nCoVSRBD與ACE2的親和力達到了15nM,因此也許可以將ACE2作為包被或檢測用,與另一個非RBD結合表位的抗體組成檢測對。

圖5 2019-nCovSRBD與ACE2復合物結構模型


2、方法學的選擇

(1)雙抗原夾心檢測抗體

優點:特異性可能比間接法高

缺點:抗原金標或酶標可能比較困難,可能穩定性不佳

(2)間接法檢測抗體

優點:穩定性高,開發簡單

缺點:特異性可能沒有雙抗原夾心法高

(3)雙抗體或受體-抗體夾心檢測抗原

優點:檢測窗口更靠前,靈敏度高

缺點:高質量抗體難以短時間內開發出來

關鍵詞:百新意 2019-nCoV病毒

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